Procédures de contrôle
1. Apparence
-- Inspection visuelle
2. Pureté (HPLC)
2.1 Instrument
Chromatographie liquide haute performance, détecteur PDA.
Balance analytique électronique
2.2 Réactif
Acétonitrile (qualité chromatographique), acide trifluoroacétique (qualité chromatographique)
2.3 Conditions chromatographiques
2.3.1 Colonne : YMC-ODS-AM, 5 μl, 250x4,6 mm
2.3.2 Longueur d'onde de détection : INC220nm
Débit : 1,0 mL/min
Taille de l'échantillon : 10 μl (référence)
Diluant : acétonitrile
Temps de collecte des données : 25.00min
2.4 Préparation de la phase mobile
Phase mobile A (eau d'acide trifluoroacétique à 0,1 %) : absorption de précision 2. Diluer l'acide trifluoroacétique Oml avec de l'eau jusqu'à 2 000 m1, bien mélanger et dégazer ;
Phase mobile B (acide trifluoroacétique acétonitrile à 0,1 %) : absorption précise, 2,0 ml d'acide trifluoroacétique ont été dilués à 2 000 m1 avec de l'acétonitrile, mélangés et dégazés ;
2.5 Programme de gradient de phase mobile
Temps (min) A% B%
0,00 90 10
13h00 10 90
18h00 10 90
18.01 90 10
23h00 90 10
2.6 Préparation de la solution échantillon
Peser et dissoudre 0,1 g d'échantillon avec de l'acétonitrile et diluer à 100 ml, bien agiter pour utilisation, ou à la même concentration. Préparez deux échantillons en parallèle.
2.7 Détermination de l'échantillon
Analyser l'échantillon selon la procédure d'échantillonnage suivante :
Plus d'une injection de solution à blanc
1 solution d'échantillon de point 1#
1 solution d'échantillon de point 2#
2.8 Calcul du résultat
2.8.1 La méthode de normalisation de l'aire des pics a été utilisée pour calculer la pureté HPLC en déduisant l'espace vide.
2.8.2 L'écart moyen relatif de pureté de deux aiguilles ne doit pas être supérieur à 1 %
2.8.3 Si les résultats des deux injections répondent aux critères d'acceptation, la pureté moyenne est prise comme résultat final.
3, point de fusion -- Instrument de point de fusion RY-1
4. Méthode de détection des pertes au séchage
4.1 Instruments :
Étuve électrique thermostatique, solde un sur dix mille.
4.2 Procédure :
Dans un flacon de pesée plat avec un couvercle rodé à poids constant et surséchage, peser 1 gramme d'échantillon (précision à 0,0001 gramme). L'échantillon doit être réparti uniformément au fond du flacon de pesée avec une épaisseur ne dépassant pas 10 mm, placé dans une étuve électrique à température constante, séché à 105-110 ℃ pendant 3 heures, puis transféré dans la salle de séchage, refroidi à température ambiante et pesé.
Calcul : Perte de poids sec %= (M1-M2) ÷M×100
Où : M1 : masse de l'échantillon et du flacon de pesée avant séchage, g
M2 : Masse de l'échantillon et du flacon de pesée après séchage, g
M : masse de l'échantillon, gramme
5. Rotation spécifique
-- La rotation spécifique est mesurée conformément à GB/T613-1988
Préparation de l'échantillon : 0,5 000 g d'échantillon ont été pesés avec précision et transférés dans une bouteille volumétrique propre et sèche de 50 ml contenant 20 ml d'acétate d'éthyle. La bouteille a été bouchée et secouée pour dissoudre l'acétate d'éthyle.
Test : ajustez le zéro du gyroscope avant le test, puis remplissez le tube à essai avec la solution échantillon, enregistrez l'angle de rotation de déviation et calculez la rotation spécifique de l'échantillon à l'aide de la formule suivante.
[α]20/D= (r×50) ÷(L×W)
Où :
[α]20/D : Rotation spécifique de la solution échantillon à 25℃
r : Rotation observée à 25℃ pour la solution échantillon
50 : Préparer le volume de la solution échantillon (ml)
w : poids de l'échantillon (g)
L : longueur du tube optique (dm)
6. Analyse TCL
Préparation de l'échantillon : un échantillon de 0,5 000 g a été pesé avec précision et transféré dans une bouteille volumétrique propre et sèche de 50 ml, 40 ml d'EtoH ont été ajoutés, la bouteille a été bouchée et secouée pour se dissoudre, puis diluée jusqu'à la balance avec de l'EtoH.
Préparation de l'échantillon témoin : un échantillon de 0,5 000 g a été pesé avec précision et déplacé dans une bouteille volumétrique propre et sèche de 50 ml, 40 ml d'eau et 2 gouttes d'acide chlorhydrique 6N ont été ajoutés, la bouteille a été bouchée et secouée pour se dissoudre, puis diluée jusqu'à la balance avec de l'eau. Ensuite, prenez 0,5 du liquide ci-dessus et diluez-le avec de l'éthanol dans un flacon de 100 ml jusqu'à obtenir un échantillon de référence contenant 1,0 % de résidus d'acides aminés.
Des échantillons de 10 microlitres ont été prélevés avec une seringue de microéchantillonnage et les échantillons ont été placés sur la plaque de silicone GF254. Des plaques à points de 5 microlitres, 10 microlitres et 15 microlitres ont été prises respectivement comme points de comparaison.
Agent de développement : n-butanol : acide acétique glacial : eau =4:1:1.
Agent révélateur de couleur : solution méthanolique à 5 % de ninhydrine.
Opération de développement de la couleur : utilisez d'abord un sèche-cheveux pour sécher la plaque de gel de silice développée, puis plongez-la dans une solution de méthanol de ninhydrine à 5 %, puis séchez-la et faites cuire à haute température dans un four électrique pour le développement de la couleur.
Jugement : examinez le temps de couleur du produit, la taille du point, la concentration de la couleur et la comparaison avec le produit témoin, jugez qu'il se situe dans cette plage.