SULFATE DE GENTAMICINE
[1405-41-0]
DÉFINITION
Mélange de sulfates de substances antimicrobiennes produites par Micromonospora purpurea, les principaux composants étant les gentamicines C1, C1a, C2, C2a et C2b.
Contenu : minimum 590 UI/mg (substance anhydre).
PERSONNAGES
Aspect : poudre hygroscopique blanche ou presque blanche.
Solubilité : librement soluble dans l'eau, pratiquement insoluble dans l'éthanol (96 %).
IDENTIFICATION
Première identification : B, C.
Deuxième identification : A, C.
A. Chromatographie sur couche mince (2.2.27).
Solution d’essai. Dissoudre 25 mg de la substance à examiner dans l'eau R et diluer à 5 mL avec le même solvant.
Solution de référence. Dissoudre le contenu d'un flacon de sulfate de gentamicine CRS dans l'eau R et diluer à 5 mL avec le même solvant.
Plaque : plaque de gel de silice CCM R.
Phase mobile : couche inférieure d'un mélange de volumes égaux d'ammoniac R concentré, de méthanol R et de chlorure de méthylène R.
Application : 10 μL.
Développement : sur 2/3 de la plaque.
Séchage : à l'air.
Détection : vaporisez avec la solution de ninhydrine R1 et chauffez à 110 ℃ pendant 5 min.
Résultats : les 3 taches principales du chromatogramme obtenu avec la solution à tester sont similaires en position, couleur et taille aux 3 taches principales du chromatogramme obtenu avec la solution de référence.
B. Examiner les chromatogrammes obtenus lors du test de composition.
Résultats : le chromatogramme obtenu avec la solution à tester (b) montre 5 pics principaux ayant les mêmes temps de rétention que les 5 pics principaux du chromatogramme obtenu avec la solution témoin (a).
C. Cela donne la réaction (a) des sulfates (2.3.1).
ESSAIS
Solution S. Dissoudre 0,8 g dans du dioxyde de carbone-eau libre R et diluer à 20 mL avec le même solvant.
Apparition de solution. La solution S est claire (2.2.1) et pas plus intensément colorée que l'intensité 6 de la gamme de solutions de référence de la couleur la plus appropriée (2.2.2, méthode II).
pH (2.2.3) : 3,5 à 5,5 pour la solution S.
Rotation optique spécifique (2.2.7) : + 107 à + 121 (substance anhydre).
Dissoudre 2,5 g dans l'eau R et diluer à 25,0 mL avec le même solvant.
Composition. Chromatographie liquide (2.2.29) : utiliser la procédure de normalisation en prenant en compte uniquement les pics dus aux gentamicines C1, C1a, C2, C2a et C2b.
Solution de test (a). Dissoudre 25,0 mg de la substance à examiner dans la phase mobile et diluer à 25,0 mL avec la phase mobile.
Solution de test (b). Diluer 5,0 mL de solution de test (a) à 25,0 mL avec la phase mobile.
Solution de référence (a). Dissoudre 5 mg de gentamicine pour l'identification du pic CRS (contenant l'impureté B) dans la phase mobile et diluer à 25 mL avec la phase mobile.
Solution de référence (b). Dissoudre 20,0 mg de sulfate de sisomicine CRS (impureté A) dans la phase mobile et diluer à 20,0 mL avec la phase mobile.
Solution de référence (c). Diluer 1,0 mL de solution de référence (b) à 100,0 mL avec la phase mobile.
Solution de référence (d). À 1 mL de solution de référence (b), ajoutez 5 mL de solution de test (a) et diluez à 50 mL avec la phase mobile.
Colonne :
- taille : l = 0,25 m, Ø = 4,6 mm ;
- phase stationnaire : gel de silice octadécylsilyl pour chromatographie R (5 μm) ;
- température : 35 ℃.
Phase mobile. À 900 mL d'eau libre de dioxyde de carbone R, ajoutez 7,0 mL d'acide trifluoroacétique R, 250,0 μL d'acide pentafluoropropanoïque R et 4,0 mL de carbonate-libre
solution d'hydroxyde de sodium R, laisser s'équilibrer et ajuster au pH 2,6 à l'aide d'une solution d'hydroxyde de sodium sans carbonate R diluée à 1 à 25. Ajouter 15 mL d'acétonitrile R et diluer à
1 000,0 mL avec du dioxyde de carbone-eau libre R.
Débit : 1,0 mL/min.
Solution post-colonne : solution d'hydroxyde de sodium sans carbonate R diluée à 1 à 25, préalablement dégazée, qui est ajoutée sans impulsion à l'effluent de la colonne à l'aide d'un serpentin de mélange polymère de 375 μL.
Débit de solution post-colonne : 0,3 mL/min.