Glutathion
C10H17N3O6S 307,32
Acide pentanoïque, 2-amino-5-[(R)-1-(carboxyméthylamino)-3-mercapto-1-oxopropan-2-ylamino]-5-oxo, (S);
N-(N-l--Glutamyl-l-cystéinyl)glycine [70-18-8].
DÉFINITION
Le glutathion contient 98,0 % de NLT et 101,0 % de NMT de C10H17N3O6S, sous forme de glutathion, calculé sur une base séchée.
IDENTIFICATION
• A. Absorption infrarouge <197K>
• B. Rotation optique, rotation spécifique <781S>
Solution d'échantillon : 40 mg/mL dans l'eau
Critères d'acceptation : 15,5° à 17,5°, à 20℃
ESSAI
• Procédure
Echantillon : 500 mg de glutathion préalablement séché
Système titrimétrique
(Voir Titrimétrie<541>.)
Mode : Titrage direct
Titrant : 0,1 N iode VS
Détection des points de terminaison : visuel
Blanc : 50 ml d'acide métaphosphorique (1 sur 50)
Analyse : Dissoudre l'échantillon dans 50 mL d'acide métaphosphorique (1 : 50) et titrer avec le titrant.
Calculez le pourcentage de glutathion (C10H17N3O6S) dans la portion de Glutathion prise :
Résultat = [(V B) × N × F × 100]/W
V = volume de titrant de l'échantillon (mL)
B = volume de titrant du blanc (mL)
N = normalité du titrant (mEq/mL)
F = facteur d'équivalence, 307,32 mg/mEq
W = poids de l'échantillon (mg)
Critères d'acceptation : 98,0 % ~ 101,0 % sur la base séchée
IMPURETÉS
Impuretés inorganiques
•Ammonium
Solution étalon : 10 µg d'ammonium provenant d'une solution diluée de chlorure d'ammonium
Solution échantillon : 50 mg de glutathion
Analyse : Transférer la solution échantillon et la solution étalon dans des pots séparés de 25 ml munis de bouchons et dissoudre dans 1 ml d'eau. Ajoutez 0,30 g d'oxyde de magnésium. Fermer immédiatement après avoir placé sous les bouchons un morceau de papier argent manganèse carré de 5-mm, mouillé de quelques gouttes d'eau. Agiter en évitant les projections de liquide et laisser reposer à 40 pendant 30 min.
Critères d'acceptation : Si le papier argent manganèse présente une couleur grise, elle n'est pas plus intense que le standard (NMT 200 ppm).
• Arsenic<211> : NMT 2 ppm
• Chlorure et sulfate, chlorure<221> : dissoudre 0,7 g avec de l'eau pour obtenir 15 ml. La solution ne contient pas plus de chlorure que ce qui correspond à 0,20 ml d'acide chlorhydrique 0,020 N (NMT 200 ppm).
• Chlorure et sulfate, sulfate 221 : dissoudre 0,8 g dans l'eau pour obtenir 15 ml. La solution ne contient pas plus de sulfate que ce qui correspond à 0,25 ml d'acide sulfurique 0,020 N (NMT 300 ppm).
• Métaux lourds, méthode I<231> : NMT 10 ppm
• Fer<241> : NMT 10 ppm
• Résidu au feu<281> : NMT 0,1 %
Impuretés organiques
• Procédure
Phase mobile : 6,8 g/L de dihydrogénophosphate de potassium avec 2,02 g/L de 1-heptane sulfonate de sodium. Ajuster avec de l'acide phosphorique à un pH de 3,0. Mélangez 970 ml de cette solution avec 30 ml de méthanol.
Solution d'adéquation du système : 0,1 mg/mL d'USP l-Phénylalanine RS, 0,5 mg/mL d'USP Glutathion RS et 0,5 mg/mL d'USP Ascorbic acid RS en phase mobile
Solution étalon : 0,01 mg/mL de USP Glutathion RS en phase mobile. [Remarque : cette solution a une concentration équivalente à 2,0 % de celle de la solution échantillon. ]
Solution échantillon : 50 mg de glutathion dans 100 mL de phase mobile. [Remarque : laissez la solution reposer pendant 5 minutes avant utilisation. ]
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Mode : LC
Détecteur : UV 210 nm
Colonne : 4,6-mm × 15-cm ; 5-µm emballage L1
Température de la colonne : 30
Débit : Ajuster pour que le temps de rétention du glutathion soit d'environ 5 min.
Taille de l'injection : 10 µL
Adéquation du système
Exemple : Solution d'adéquation du système
Exigences d'aptitude
Résolution : NLT 5,0 entre les pics d’acide ascorbique et de glutathion ; et NLT 5,0 entre les pics de glutathion et de l-phénylalanine
Écart type relatif : NMT 1,5 % pour les injections répétées
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Calculez le pourcentage de toute impureté dans la portion de glutathion prise :
Résultat = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = réponse maximale de tout pic provenant de la solution échantillon autre que le glutathion
rS = réponse maximale du pic de glutathion de la solution étalon
CS = concentration de USP Glutathion RS dans la solution étalon (mg/mL)
CU = concentration de glutathion dans la solution échantillon (mg/mL)
Critères d'acceptation
Impureté individuelle : NMT 1,5 % pour l'impureté avec un temps de rétention relatif d'environ 4
Impuretés totales : NMT 2,0 %
TESTS SPÉCIFIQUES
• Clarté et couleur de la solution
Solution échantillon : 0,1 g/mL dans l'eau
Analyse : A l'aide de tubes identiques en verre incolore, transparent et neutre, à fond plat et d'un diamètre intérieur de 15-25 mm, comparer le liquide à examiner avec de l'eau, la profondeur de la couche étant de 40 mm. Comparez les couleurs à la lumière du jour diffuse, en regardant verticalement sur un fond blanc.
Critères d'acceptation : La solution est limpide et incolore.
• Perte au séchage <731> : NMT 0,5 %, 105℃ pendant 3 h
EXIGENCES SUPPLÉMENTAIRES
• Conditionnement et stockage : Conserver dans des contenants hermétiques.
• Normes de référence USP<11>
USP Acide ascorbique RS
USP Glutathion RS
USP l-Phénylalanine RS