Sélénométhionine
C5H11NO2Se 196,11
Acide (S)-2-Amino-4-(méthylsélényl)butyrique [1464-42-2].
DÉFINITION
La sélénométhionine contient 97,0 % de NLT et 103,0 % de NMT de sélénométhionine (C5H11NO2Se) et contient 39,0 % de NLT et 41,0 % de NMT de sélénium (Se), calculés tels quels.
IDENTIFICATION
• A. Absorption infrarouge <197K>
ESSAI
• Procédure
Phase mobile : 6,8 g/L de phosphate monobasique de potassium dans l'eau. Ajuster avec de l'acide phosphorique à un pH de 2,75 ± 0,25.
Solution d'adéquation du système : 0,16 mg/mL d'USP Sélénométhionine RS et 0,8 mg/mL d'USP L-Méthionine RS en phase mobile
Solution étalon : 0,16 mg/mL de Sélénométhionine RS USP en phase mobile
Solution échantillon : 0,16 mg/mL de sélénométhionine en phase mobile avec sonication. Passer à travers une membrane filtrante de 0,45-µm de taille de pores.
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Mode : LC
Détecteur : UV 220 nm
Colonne : 4,6-mm × 25-cm ; garniture L1 avec extrémité polaire-bouchage
Débit : 1 mL/min
Taille de l'injection : 20 µL
Adéquation du système
Exemple : Solution d'adéquation du système
[Remarque-Les temps de rétention relatifs pour la méthionine et la sélénométhionine sont respectivement de 0,8 et 1,0.]
Exigences d'aptitude
Résolution : NLT 3.0 entre la méthionine et la sélénométhionine
Facteur de queue : NMT 2,0 pour le pic de sélénométhionine
Écart type relatif : NMT 2,0 % pour le pic de sélénométhionine
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Calculez le pourcentage de sélénométhionine (C5H11NO2Se) dans la portion de sélénométhionine prise :
Résultat = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = réponse maximale de la solution échantillon
rS= réponse maximale de la solution standard
CS = concentration de sélénométhionine RS USP dans la solution étalon (mg/mL)
CU = concentration de sélénométhionine dans la solution échantillon (mg/mL)
Critères d'acceptation : 97,0 %-103,0 % en l'état
IMPURETÉS
• Métaux lourds, méthode I<231> : NMT 20 ppm
• Limite de sodium
Solution mère étalon : 10 µg/mL de sodium à partir de chlorure de sodium, préalablement séché à 105°C pendant 2 h
Solutions étalons : 0,2, 0,5 et 1,0 µg/mL de sodium. Pipeter 2,0, 5,0 et 10,0 ml de solution mère étalon dans des fioles jaugées séparées de 100 - ml. Dans chaque flacon, ajoutez 2,0 ml de solution de chlorure de potassium (1 sur 5) et 1,0 ml d'acide chlorhydrique et diluez avec de l'eau jusqu'au volume.
Solution échantillon : Transférer 100 mg de sélénométhionine dans une fiole jaugée de 100 ml, ajouter 2,0 ml de solution de chlorure de potassium (1 sur 5) et 1,0 ml d'acide chlorhydrique, puis diluer avec de l'eau jusqu'au volume.
Conditions instrumentales
(Voir Spectrophotométrie et lumière - Diffusion <851>.)
Mode : Spectrophotométrie d'absorption atomique
Longueur d'onde analytique : 589 nm
Lampe : Sodium creux-cathode
Flamme : Air-acétylène
Analyse
Échantillons : solutions étalons et solution échantillon
Déterminez les absorbances des solutions. Tracez les absorbances des solutions étalons en fonction de leurs concentrations (µg/mL de sodium) et tracez la ligne droite correspondant le mieux aux points tracés. À partir du graphique ainsi obtenu, déterminez la concentration de sodium, CNa (µg/mL), dans la solution échantillon.
Calculez le pourcentage de sodium dans la portion de Sélénométhionine prise :
Résultat = (CNa/CSA) × F × 100
CNa= concentration de sodium dans la solution échantillon (µg/mL), déterminée à partir de la droite de régression
CSA = concentration de sélénométhionine dans la solution échantillon (mg/mL)
F= facteur de conversion, 0,001 mg/µg
Critères d'acceptation : NMT 0,1 %
• Pureté chromatographique
Solution étalon A : Transférer 50 mg d'USP Sélénométhionine RS dans une fiole jaugée de 10-mL, ajouter 2 mL d'eau, réchauffer pour dissoudre si nécessaire et diluer avec du méthanol jusqu'au volume.
Solution étalon B : Transférer 1,0 mL de solution étalon A dans une fiole jaugée de 100 - mL et diluer avec du méthanol jusqu'au volume.
Solution échantillon : Transférer 50 mg de sélénométhionine dans une fiole jaugée de 10-mL, ajouter 2 ml d'eau, réchauffer pour dissoudre si nécessaire et diluer avec du méthanol jusqu'au volume.
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Mode : CCM
Absorbant : couche de 0,25-mm de mélange de gel de silice chromatographique
Volume d'application : 10 µL
Solvant de développement : Butanol, acide acétique glacial et eau (4:1:1)
Réactif pour pulvérisation : 2 mg/mL de ninhydrine dans de l'alcool
Analyse
Échantillons : solution étalon A, solution étalon B et solution échantillon
Procédez comme indiqué pour la chromatographie<621>, la chromatographie en couche mince. Laisser sécher les taches et développer le chromatogramme dans le solvant de développement jusqu'à ce que le front du solvant se soit déplacé des trois quarts de la longueur de la plaque. Retirez la plaque de la chambre de développement, marquez le devant du solvant et laissez le solvant s'évaporer. Localisez les taches sur la plaque en pulvérisant du réactif Spray et en la séchant à 110 °C pendant 10 min.
Critères d'acceptation : NMT 1,0 %. La valeur RF du point principal de la solution échantillon correspond à celle de la solution standard A ; et aucun point, autre que le point principal de la solution échantillon, n'est plus grand ou plus intense que le point principal de la solution étalon B.
TESTS SPÉCIFIQUES
• Rotation optique, rotation spécifique <781S>
Solution échantillon : 10 mg/mL dans de l'acide chlorhydrique 1 N
Critères d'acceptation : +17,0 à +19,5
• Contenu en sélénium
[Attention-Le sélénium est toxique ; manipulez-le avec soin.]
Solution mère étalon : Dissoudre 1 g de sélénium métallique dans un volume minimum d'acide nitrique. Évaporer à sec, ajouter 2 ml d'eau et évaporer à sec. Répéter l'ajout d'eau et l'évaporation à sec trois fois. Dissoudre le résidu dans de l'acide chlorhydrique 3 N, transférer dans une fiole jaugée de 1 000 ml et diluer avec de l'acide chlorhydrique 3 N jusqu'au volume. Cette solution contient 1000 µg/mL de sélénium.
Solutions standards : 20, 50 et 100 µg/mL de sélénium. Pipeter 2,0, 5,0 et 10,0 ml de solution mère étalon dans des fioles jaugées séparées de 100 - ml. Diluer le contenu de chaque flacon avec de l'eau jusqu'au volume.
Solution échantillon : 0,125 mg/mL de sélénométhionine dans l'eau
Conditions instrumentales
(Voir Spectrophotométrie et lumière - Diffusion <851>.)
Mode : Spectrophotométrie d'absorption atomique
Longueur d'onde analytique : 196 nm
Lampe : Sélénium creux-cathode
Flamme : Air-acétylène
Vierge : Eau
Analyse
Échantillons : solutions étalons et solution échantillon
Déterminez les absorbances des solutions. Tracez les absorbances des solutions étalons en fonction de leurs concentrations (µg/mL de sélénium) et tracez la ligne droite correspondant le mieux aux points tracés. À partir du graphique ainsi obtenu, déterminez la concentration de sélénium, CSe (µg/mL), dans la solution échantillon.
Calculez le pourcentage de sélénium dans la portion de Sélénométhionine prise :
Résultat = (CSe/CSA) × F × 100
CSe= concentration de sélénium dans la solution échantillon (µg/mL), déterminée à partir de la droite de régression
CSA = concentration de sélénométhionine dans la solution échantillon (mg/mL)
F= facteur de conversion, 0,001 mg/µg
Critères d'acceptation : 39,0 %-41,0 % en l'état
EXIGENCES SUPPLÉMENTAIRES
• Conditionnement et stockage : Conserver dans des contenants bien fermés.
• Normes de référence USP<11>
USP L-Méthionine RS
USP Sélénométhionine RS