Entécavir
C12H15N5O3·H2O 295,29
6H-Purin-6-one, 2-amino-1,9-dihydro-9-[(1S,3R,4S)-4-hydroxy-3-(hydroxymethyl)-2-méthylènecyclopentyl]-, monohydraté ;
9-[(1S,3R,4S)-4-Hydroxy-3-(hydroxyméthyl)-2-méthylènecyclopentyl]guanine monohydraté [209216-23-9] ; UNII : 5968Y6H45M.
Anhydre 277,28
DÉFINITION
L'entécavir est un monohydrate et contient 98 % de NLT et 102 % de NMT d'entécavir (C12H15N5O3), calculés sur une base anhydre.
IDENTIFICATION
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• A. TESTS D'IDENTIFICATION SPECTROSCOPIQUE<197>, Spectroscopie Infrarouge : 197A ou 197K (CN 1-Mai-2020)
• B. Le temps de rétention du pic principal de la solution échantillon correspond à celui de la solution standard, tel qu'obtenu dans le test.
ESSAI
• PROCÉDURE
Solution A : Acétonitrile et eau (3:97)
Solution B : Acétonitrile
Phase mobile : voir le tableau 1. [REMARQUE- Les temps d'élution en gradient sont établis sur un système HPLC avec un volume de séjour d'environ 1,0 mL.]
Tableau 1 Temps (min) Solution A (%) Solution B (%)
0 100 0
8 100 0
50 77 23
75 17 83
90 100 0
100 100 0
Solution mère d’adéquation du système : 1,0 mg/mL de mélange d’adéquation du système USP Entecavir RS dans du méthanol
Solution d'adéquation du système : 0,2 mg/mL de mélange d'adéquation du système USP Entecavir RS dans la solution A à partir de la solution mère d'adéquation du système
Solution mère étalon : 1,0 mg/mL d’USP Entecavir Monohydrate RS dans du méthanol. Faire soniquer au besoin.
Solution étalon : 0,2 mg/mL d'USP Entecavir Monohydrate RS dans la solution A à partir de la solution mère étalon
Exemple de solution mère : 1,0 mg/mL d’Entécavir dans du méthanol. Faire soniquer au besoin.
Solution échantillon : 0,2 mg/mL d’entécavir dans la solution A à partir de la solution mère échantillon
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Mode : LC
Détecteur : UV 254 nm
Colonne : 4,6-mm × 25-cm ; 5-µm emballage L1
Débit : 1 mL/min
Volume d'injection : 10 µL
Adéquation du système
Exemples : solution d'adéquation du système et solution standard
[ REMARQUE - Voir le tableau 2 pour les temps de rétention relatifs des composants dans la solution d'adéquation du système.]
Exigences d'aptitude
Résolution : NLT 3,5 entre l'entécavir 1-épimère et l'entécavir ; NLT 2.0 entre l'entécavir et le 8-hydroxy entécavir, système
solution adaptée
Facteur de queue : 0,8-1,5 pour l'entécavir, solution d'adéquation du système
Écart type relatif : NMT 1,5 %, solution standard
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Calculez le pourcentage d'entecavir (C12H15N5O3) dans la portion d'Entecavir prise :
Résultat = (ru /rs ) × (Cs /Cu ) × 100
ru = réponse maximale de l'entécavir à partir de la solution échantillon
rs = réponse maximale de l'entécavir de la solution étalon
Cs = concentration d'USP Entecavir Monohydrate RS dans la solution étalon (mg/mL)
Cu = concentration d'entécavir dans la solution échantillon (mg/mL)
Critères d'acceptation : 98%-102% sur base anhydre
IMPURETÉS
• IMPURETÉS ORGANIQUES
Solution A, Solution B, Phase mobile, Solution mère d'adéquation du système, Solution d'adéquation du système, Solution mère d'échantillon, Solution d'échantillon et Système chromatographique : procédez comme indiqué dans le test.
Solution mère étalon : utilisez la solution étalon du test.
Solution étalon : 0,2 µg/mL d'USP Entecavir Monohydrate RS dans la solution A à partir de la solution mère étalon
Adéquation du système
Exemples : solution d'adéquation du système et solution standard
[ REMARQUE - Voir le tableau 2 pour les temps de rétention relatifs des composants dans la solution d'adéquation du système.]
Exigences d'aptitude
Résolution : NLT 3,5 entre l'entécavir 1-épimère et l'entécavir ; NLT 2.0 entre l'entécavir et le 8-hydroxy entécavir, solution d'adéquation du système
Facteur de queue : 0,8-1,5 pour l'entécavir, solution d'adéquation du système
Écart type relatif : NMT 10,0 %, solution standard
Analyse
Échantillons : solution échantillon et solution standard
Calculez le pourcentage de chaque impureté dans la portion d'Entecavir prise :
Résultat = (ru /rs ) × (Cs /Cu ) × (1/F) × 100
ru = réponse maximale de chaque impureté de la solution échantillon
rs = réponse maximale de l'entécavir de la solution étalon
Cs = concentration d'USP Entecavir Monohydrate RS dans la solution étalon (mg/mL)
Cu = concentration d'entécavir dans la solution échantillon (mg/mL)
F = facteur de réponse relatif (voir tableau 2)
Critères d'acceptation : Voir le tableau 2. Ne pas tenir compte de tout pic inférieur à 0,05 %.
Tableau 2
Nom Temps de rétention relatif Facteur de réponse relatif Critères d’acceptation, NMT (%)
Furoentécavir a 0,73 1,0 0,1
Entécavir 1-épimère b 0,93 1,0 0,1
Entécavir 3-épimère c 0,96 1,0 0,1
Entécavir 1.0 – -
8-Hydroxy entécavir d 1,03 0,67 0,1
Entécavir 4-épimère e 1,08 1,0 0,1
8-Méthoxy entécavir f 1,27 0,67 0,1
4-Diméthylsilyl entécavir g 1,84 1,0 0,1
Composé apparenté à l'entécavir A 3,41 – -
Toute impureté non spécifiée – 1,0 0,1
Impuretés totales i – - 0,3
une 9-[(3aS,4S,6S,6aR)-3a,6-Dihydroxyhexahydro-1H-cyclopenta[c]furan-4-yl]guanine.
b 9-[(1R,3R,4S)-4-Hydroxy-3-(hydroxyméthyl)-2-méthylènecyclopentyl]guanine.
c 9-[(1S,3S,4S)-4-Hydroxy-3-(hydroxyméthyl)-2-méthylènecyclopentyl]guanine.
d 8-Hydroxy-9-[(1S,3R,4S)-4-hydroxy-3-(hydroxyméthyl)-2-méthylènecyclopentyl]guanine.
e 9-[(1S,3R,4R)-4-Hydroxy-3-(hydroxyméthyl)-2-méthylènecyclopentyl]guanine.
f 8-Méthoxy-9-[(1S,3R,4S)-4-hydroxy-3-(hydroxyméthyl)-2-méthylènecyclopentyl]guanine.
g 9-[(1S,3R,4S)-4-Hydroxydiméthylsilyl-3-(hydroxyméthyl)-2-méthylènecyclopentyl]guanine.
h Pour information seulement ; quantifié dans le test pour la limite du composé A apparenté à l'entécavir.
i Comprend la somme de toutes les impuretés trouvées dans les tests de limite du composé A associé à l'entécavir et des impuretés organiques.
• LIMITE DU COMPOSÉ A ASSOCIÉ À L'ENTÉCAVIR
Solution A : 0,1 % (v/v) d'acide trifluoroacétique dans l'eau
Solution B : 0,1 % (v/v) d'acide trifluoroacétique dans de l'acétonitrile
Phase mobile : voir le tableau 3. [ REMARQUE- Les temps d'élution en gradient sont établis sur un système HPLC avec un volume de séjour de
environ 1,0 ml.]
Tableau 3
Temps (min) Solution A (%) Solution B (%)
0 65 35
8 53 47
8,1 65 35
11 65 35
Solution étalon : 2 µg/mL de composé apparenté A RS USP à l'entécavir dans du méthanol
Solution échantillon : 1,0 mg/mL d’Entecavir dans du méthanol. Faire soniquer au besoin.
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Mode : LC
Détecteur : UV 254 nm
Colonne : 4,6-mm × 5-cm ; 5-µm emballage L1
Températures
Échantillonneur automatique : 4°
Colonne : 30°
Débit : 2 mL/min
Volume d'injection : 10 µL
Adéquation du système
Échantillon : Solution étalon
Exigences d'aptitude
Facteur de queue : 0,8-1,5
Écart type relatif : NMT 3,0 %
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Calculez le pourcentage de composé A lié à l'entécavir dans la portion d'entécavir prise :
Résultat = (ru /rs ) × (Cs /Cu ) × 100
ru = réponse maximale du composé A lié à l'entécavir à partir de la solution échantillon
rs = réponse maximale du composé A apparenté à l'entécavir de la solution étalon
Cs = concentration du composé apparenté A RS de l'USP Entécavir dans la solution étalon (mg/mL)
Cu = concentration d'entécavir dans la solution échantillon (mg/mL)
Critères d'acceptation : NMT 0,1 %
TESTS SPÉCIFIQUES
• DÉTERMINATION DE L'EAU<921>, Méthode I, Méthode Ic : 5,5 %-7,0 %
• ROTATION OPTIQUE<781S>, Procédures, Rotation Spécifique
Solution échantillon : 10 mg/mL d'Entecavir dans un mélange de diméthylformamide et de méthanol (50:50)
Critères d'acceptation : +24° à +30°
EXIGENCES SUPPLÉMENTAIRES
• CONDITIONNEMENT ET CONSERVATION : Conserver dans des récipients bien fermés, à l'abri de la lumière. Conserver à température ambiante.
• NORMES DE RÉFÉRENCE USP<11>
USP Entécavir monohydraté RS
USP Composé apparenté à l'entécavir A RS
3-Benzyl-4-silyl entécavir ;
9-[(1S,3R,4S)-4-Diméthylphénylsilyl-3-(benzyloxyméthyl)-2-méthylènecyclopentyl]guanine.
C27H31N5O2Si 485,65
USP Entecavir Adéquation du système Mélange RS
Le mélange contient du monohydrate d'entécavir et les impuretés suivantes (d'autres impuretés peuvent également être présentes) :
Entécavir 1-épimère.
8-Hydroxy entécavir.
8-Méthoxy entécavir.

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