Orlistat
C29H53NO5 495,73
l-Leucine, N-formyl-, 1-[(3-hexyl-4-oxo-2-oxetanyl)methyl]dodécyl ester, [2S-[2(R*), 3]]-;
N-Formyl-l-leucine, ester avec (3S,4S)-3-hexyl-4-[(2S)-2-hydroxytridecyl]-2-oxetanone [96829-58-2].
DÉFINITION
Orlistat contient 98,0 % de NLT et 101,5 % de NMT de C29H53NO5, calculés sur une base anhydre et sans solvant.
IDENTIFICATION
• A. Absorption infrarouge <197M>
• B. Le temps de rétention du pic principal de la solution échantillon correspond à celui de la solution standard, tel qu'obtenu dans le test.
ESSAI
• Procédure
[Remarque-Évitez d'utiliser des flacons en plastique pour la préparation ou le confinement de toute solution dans cette analyse. ]
Phase mobile : Acétonitrile, acide phosphorique et eau (860 : 0,05 : 140)
Solution étalon : 0,5 mg/mL d'USP Orlistat RS en phase mobile. Injecter immédiatement après la préparation ou conserver à 5 heures.
Solution échantillon : 0,5 mg/mL d’Orlistat en phase mobile. Injecter immédiatement après la préparation ou conserver à 5 heures.
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Mode : LC
Détecteur : UV 195
Colonne : 3,9-mm × 15-cm ; 4-µm emballage L1
Débit : 1,0 mL/min
Taille de l'injection : 20 µL
Adéquation du système
Échantillon : Solution étalon
Exigences d'aptitude
Écart type relatif : NMT 2,0 %
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Calculez le pourcentage d'orlistat (C29H53NO5) dans la portion d'Orlistat prélevée :
Résultat = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = réponse maximale de la solution échantillon
rS = réponse maximale de la solution standard
CS = concentration d'USP Orlistat RS dans la solution étalon (mg/mL)
CU = concentration d'Orlistat dans la solution échantillon (mg/mL)
Critères d'acceptation : 98,0%-101,5% sur base anhydre, sans solvant-
IMPURETÉS
Impuretés inorganiques
• Résidu au feu<281> : NMT 0,1 %
• Métaux lourds, méthode II<231> : 20 ppm
Impuretés organiques
• Procédure 1 : Limite du composé A lié à l'Orlistat
Solution étalon : 0,1 mg/mL de composé apparenté A RS USP Orlistat dans de l'acétone
Solution échantillon : 50 mg/mL d’Orlistat dans de l’acétone
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Chromatographie en couche mince.)
Mode : CCM
Adsorbant : couche de 0,25-mm de mélange de gel de silice chromatographique
Volume d'application : 10 µL
Système de solvant de développement : Toluène et acétate d'éthyle (4:1)
Solution de détection : Transférer 2,5 g d'acide phosphomolybdique et 1 g de sulfate cerrique dans une fiole jaugée de 100 - mL, dissoudre et diluer avec du méthanol jusqu'au volume.
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Retirez la plaque et séchez-la soigneusement à l'air libre. Vaporisez la plaque séchée avec la solution de détection et placez la plaque dans une étuve à 120° pendant 30 min.
Critères d'acceptation : Toute tache secondaire de la solution échantillon correspondant au composé A lié à l'orlistat n'est pas plus intense que la tache correspondante de la solution standard (0,2 %).
• Procédure 2 : Limite du composé B lié à l'Orlistat
Solution étalon : 0,025 mg/mL de composé apparenté à l'orlistat USP B RS dans du chlorure de méthylène
Solution échantillon : 50 mg/mL d’Orlistat dans du chlorure de méthylène
Solution d'échantillon enrichie : 50 mg/mL d'Orlistat dans une solution étalon
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Mode : GC
Détecteur : ionisation de flamme
Colonne : 0,32-mm x 30-m de silice fondue, recouverte d'une phase stationnaire G27 de 0,25-µm
Température de la colonne : Voir le tableau du programme de température ci-dessous.
Température initiale () Rampe de température (/min) Température finale () Temps de maintien à la température finale (min)
50 4 170 -
170 30 300 30
Température
Injecteur : 270
Détecteur : 280
Gaz porteur : Hélium
Débit : 30 mL/min
Rapport de partage : 10:1
Taille de l'injection : 2 µL
Adéquation du système
Échantillon : Solution étalon
Exigences d'aptitude
Écart type relatif : NMT 10,0 %
Analyse
Échantillons : solution échantillon et solution échantillon enrichie
Calculez le pourcentage de composé B lié à l’orlistat dans la portion d’Orlistat prise :
Résultat = [rU/(rSP rU)] × (CS/CT) × 100
rU = réponse maximale du composé B lié à l'orlistat à partir de la solution échantillon
rSP = réponse maximale du composé B lié à l'orlistat de la solution échantillon enrichie
CS = concentration du composé apparenté USP Orlistat B RS dans la solution étalon (mg/mL)
CT = concentration d'Orlistat dans la solution échantillon enrichie (mg/mL)
Critères d'acceptation : NMT 0,05 % du composé B lié à l'orlistat est trouvé.
• Procédure 3
[Remarque-Évitez d'utiliser des flacons en plastique pour la préparation ou le confinement de toute solution dans cette analyse. ]
Phase mobile, solution étalon et solution échantillon : préparer comme indiqué dans le test.
Solution d'adéquation du système : 10 µg/mL d'USP Orlistat RS, 0,1 µg/mL de composé associé à l'USP Orlistat C RS et 0,25 µg/mL de composé associé à l'USP Orlistat D RS en phase mobile
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Procédez comme indiqué dans le test, sauf pour chromatographier la solution d'adéquation du système.
Adéquation du système
Exemple : Solution d'adéquation du système
Exigences d'aptitude
Rapport signal-sur-bruit : NLT 3 pour les pics du composé C lié à l'orlistat et du composé D lié à l'orlistat
Écart type relatif : NMT 10,0 % pour le pic de l'orlistat
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Calculez le pourcentage de chaque impureté dans la portion d’Orlistat prélevée :
Résultat = (rU/rS) × (CS/CU) × (1/F) × 100
rU = réponse maximale pour chaque impureté individuelle de la solution échantillon
rS = réponse maximale de l'USP Orlistat RS de la solution étalon
CS = concentration d'USP Orlistat RS dans la solution étalon (mg/mL)
CU = concentration d'Orlistat dans la solution échantillon (mg/mL)
F = facteur de réponse relatif tel qu'indiqué dans le tableau des impuretés 1
Critères d'acceptation : Voir le tableau d'impuretés 1.
Tableau d'impuretés 1
Nom Temps de rétention relatif Facteur de réponse relatif Critères d’acceptation, NMT (%)
Formyleucinea 0,10 4,0 0,2
Composé apparenté à l'orlistat C 0,13 33 0,05
Orlistat épimère à anneau ouvert 0,44 1,0 0,2
Composé apparenté à l'orlistat D* 0,90 - Calculé en
Procédure 4
Orlistat anneau ouvert amidec* 0,90 - Calculé en
Procédure 4
Orlistat 1,00 - -
d-Leucine orlistatd 1,18 1,0 0,2
Impureté individuelle non identifiée - 1,0 0,1
* Coélutes dans ce système LC, déterminés à l'aide de la procédure 4.
une N-Formyl-l-leucine.
b (2S,3R,5S)-5-[(S)-2-Formylamino-4-méthyl-pentanoyloxy]-2-hexyl-3-hydroxy-acide hexadécanoïque.
c N-Formyl-l-leucine (S)-1-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[1-phényl-R-éthylcarbomoyl]nonyl]-dodécyle ester.
d N-Formyl-d-leucine (S)-1-[[(2S,3S)-3-hexyl-4-oxo-2-oxetanyl]méthyl]dodécyl ester ou énantiomère.
• Procédure 4 : Limite du composé D lié à l'Orlistat
Phase mobile : Méthanol et eau (83:17)
Solution d'adéquation du système : 4 mg/mL d'USP Orlistat RS et 2,4 µg/mL de USP Orlistat Related Compound D RS dans l'acétonitrile, respectivement
Solution étalon : 5,0 mg/mL d'USP Orlistat RS dans de l'acétonitrile
Solution échantillon : 5,0 mg/mL d'Orlistat dans de l'acétonitrile
Système chromatographique
(Voir Chromatographie 621, Adéquation du système.)
Mode : LC
Détecteur : 205 nm
Colonne : 4,0-mm × 25-cm ; 5-µm emballage L7
Débit : 0,6 mL/min
Taille de l'injection : 20 µL
Adéquation du système
Exemple : Solution d'adéquation du système
Exigences d'aptitude
Rapport signal-sur-bruit : NLT 3 pour le pic du composé D lié à l'orlistat
Écart type relatif : NMT 10,0 % pour le pic de l'orlistat
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Calculez le pourcentage de chaque impureté dans la portion d’Orlistat prélevée :
Résultat = (rU/rS) × (CS/CU) × (1/F) × 100
rU = réponse maximale pour chaque impureté individuelle de la solution échantillon
rS = réponse maximale pour USP Orlistat RS de la solution standard
CS = concentration d'USP Orlistat RS dans la solution étalon (µg/mL)
CU = concentration d'Orlistat dans la solution échantillon (µg/mL)
F = facteur de réponse relatif obtenu dans le tableau d'impuretés 2
Critères d'acceptation : Voir le tableau d'impuretés 2.
Tableau d'impuretés 2
Nom Temps de rétention relatif Facteur de réponse relatif Critères d’acceptation, NMT (%)
Composé apparenté à l’orlistat D 0,94 1,0 0,2
Orlistat 1,00 - -
Orlistat amidéa à anneau ouvert 1,25 4,3 0,1
un ester de N-formyl-l-leucine (S)-1-[(2S,3S)-2-hydroxy-3-[1-phényl-R-éthylcarbomoyl]nonyl]-dodécyle.
• Procédure 5 : Limite du composé E lié à l'Orlistat
Tampon : solution de borate 0,4 N, ajustée à un pH de 10,2
Agent de dérivation : solution d'o-Phthaldéhyde (OPA). [Remarque - S'il n'est pas possible de l'obtenir dans le commerce, l'agent de dérivitisation peut être préparé à raison de 1 % chacun d'acide 3-mercaptopropionique et d'o-phtaldialdéhyde dans une solution tampon de borate 0,4 M.]
Solution A : Transférer 4,1 g d’acétate de sodium trihydraté et 40 mg d’acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) dans une fiole jaugée de 1-L. Dissoudre dans 950 ml d'eau et ajuster avec de l'hydroxyde de sodium 0,1 N à un pH de 7,2. Diluer avec de l'eau jusqu'au volume, ajouter 2,5 mL de tétrahydrofurane et mélanger. Filtrer et dégazer.
Solution B : Transférer 2,7 g d’acétate de sodium trihydraté et 40 mg d’EDTA dans une fiole jaugée de 1-L. Dissoudre dans 200 ml d'eau et ajuster avec de l'hydroxyde de sodium 0,1 N à un pH de 7,2. Ajouter 800 ml d'acétonitrile, filtrer et dégazer.
Phase mobile : Voir le tableau des dégradés ci-dessous.
Temps (min) Solution A (%) Solution B (%)
0 96,7 3,3
20 60 40
24 0 100
38 0 100
38 96,7 3,3
45 96,7 3,3
Solution standard : Transférer une quantité pesée d'environ 0,2 mg du composé E RS associé à l'Orlistat USP dans un flacon de 20 ml d'espace de tête. Ajouter 10 ml d'hydroxyde de sodium 4 N et fermer le flacon. Chauffer le flacon à 100°C pendant 1 h, puis laisser refroidir à température ambiante. Transférer 2 ml de la solution obtenue dans une fiole jaugée de 50 - ml et diluer avec de l'eau jusqu'au volume. À 0,5 ml de cette solution, ajoutez 2,0 ml de tampon et 0,5 ml d'agent dérivé.
Solution échantillon : procédez comme indiqué pour la solution standard, mais utilisez plutôt 25 mg d'Orlistat pour remplacer les 0,2 mg de composé associé à l'Orlistat USP E RS.
Système chromatographique
(Voir Chromatographie<621>, Adéquation du système.)
Mode : LC
Détecteur : Fluorescence 340 nm (excitation) ; 450 nm (émission)
Colonnes
Garde : 2,1-mm × 2-cm ; 50-µm emballage L1
Analytique : 2,1-mm × 20-cm ; emballage L1
Débit : 0,5 mL/min
Taille de l'injection : 20 µL
Adéquation du système
Échantillon : Solution étalon
Exigences d'aptitude
Écart type relatif : NMT 6,0 % pour le pic du composé E lié à l'orlistat
Analyse
Échantillons : solution standard et solution échantillon
Calculez le pourcentage de cette impureté dans la portion d'Orlistat prélevée :
Résultat = (rU/rS) × (CS/CU) × 100
rU = réponse maximale pour le composé E lié à l'orlistat dans la solution échantillon
rS = réponse maximale pour le composé associé à l'Orlistat USP E RS dans la solution étalon
CS = concentration du composé apparenté USP Orlistat E RS dans la solution étalon (mg/mL)
CU = concentration d'Orlistat dans la solution échantillon (mg/mL)
Critères d'acceptation
Impureté individuelle : NMT 0,2 % du composé E lié à l'orlistat est trouvé.
Impuretés totales : NMT 1,0 % des impuretés totales sont trouvées, les résultats des procédures 1, 2, 3, 4 et 5 étant ajoutés.
TESTS SPÉCIFIQUES
• Rotation optique, rotation spécifique <781>
Solution d'échantillon : 30 mg/mL dans de l'alcool déshydraté
Critères d'acceptation : Entre -48,0 et -51,0, à 20
• Détermination de l'eau, méthode Ic<921> : NMT 0,2 %
EXIGENCES SUPPLÉMENTAIRES
• Conditionnement et stockage : Conserver dans des récipients bien fermés entre 2 et 8℃.
• Normes de référence USP<11>
USP Orlistat RS
Composé A RS lié à l'Orlistat USP
Composé B RS lié à l'Orlistat USP
Composé C RS lié à l'Orlistat USP
Composé D RS lié à l'Orlistat USP
Composé E RS lié à l'Orlistat USP
USP35