Pénicillamine
C5H11NO2S 149,21
d-Valine, 3-mercapto-.
d-3-Mercaptovaline [52-67-5].
» La pénicillamine ne contient pas moins de 97,0 pour cent et pas plus de 102,0 pour cent de C5H11NO2S, calculé sur une base séchée.
Emballage et stockage- Conserver dans des contenants hermétiques.
Normes de référence USP<11>-
USP Pénicillamine RS
USP Pénicilline G Potassium RS
USP Disulfure de pénicillamine RS
C10H20N2O4S2
Identification-
A : Absorption infrarouge <197 M > (50 mg sur 300 mg).
B : Dissoudre 10 mg dans 5 mL d'eau, et ajouter 1 goutte de soude 5 N et 20 mg de ninhydrine : une couleur bleue ou violet-bleu apparaît immédiatement.
C : Dissoudre 20 mg dans 4 mL d'eau, ajouter 2 mL de solution d'acide phosphotungstique (1 sur 10) et chauffer presque jusqu'à ébullition : une couleur bleu foncé se produit immédiatement.
Rotation spécifique<781S> : entre 60,5 et 64,5.
Solution d'essai : 50 mg par mL, dans de l'hydroxyde de sodium 1,0 N.
pH<791> : entre 4,5 et 5,5, en solution (1 pour 100).
Perte au séchage<731>- Sécher environ 100 mg, pesés avec précision, dans un flacon capillaire bouché sous vide à une pression n'excédant pas 5 mm de mercure à 60° pendant 3 heures : il ne perd pas plus de 0,5% de son poids.
Résidu au feu<281> : pas plus de 0,1%, le résidu carbonisé étant humidifié avec 2 mL d'acide nitrique et 5 gouttes d'acide sulfurique.
Métaux lourds, méthode II<231> : pas plus de 0,002 %.
Limite d'activité de la pénicilline -
Tampon pH 2,5 - Dissoudre 100 g de phosphate de potassium monobasique dans l'eau, ajouter 0,2 ml d'acide chlorhydrique, diluer avec de l'eau jusqu'à 1 000 ml et mélanger. Ajuster si nécessaire avec de l'acide phosphorique ou de la potasse 10 N jusqu'à un pH de 2,5.
Préparation standard- Préparez comme indiqué pour la pénicilline G dans le tableau 1 sous Antibiotiques-Tests microbiens 81, sauf pour préparer une solution mère finale contenant 100 unités de pénicilline G par ml et six dilutions de test allant de 0,005 unité de pénicilline G par ml à 0,2 unité de pénicilline G par ml, et pour utiliser une dose médiane de la norme de 0,050 unité de pénicilline G par ml.
Préparation aux tests- Dissoudre 1,0 g dans l'eau pour obtenir 18,0 ml, transférer 9,0 ml de cette solution dans un séparateur, ajouter 20 ml d'acétate d'amyle et 1 ml de tampon pH 2,5 et agiter. Laisser les couches se séparer et aspirer la couche aqueuse dans un deuxième séparateur, en conservant l'extrait d'acétate d'amyle dans le premier séparateur. Vérifiez le pH de la couche aqueuse et s'il est supérieur à 3,0, ajustez-le avec de l'acide chlorhydrique à un pH de 2,5 et extrayez avec 20 ml d'acétate d'amyle. Jeter la couche aqueuse et ajouter l'extrait d'acétate d'amyle au premier séparateur. Laver les extraits d’acétate d’amyle combinés avec 10 ml de tampon dilué pH 2,5 (1 sur 10) et jeter la couche aqueuse. Extrayez l’acétate d’amyle avec 10,0 ml de tampon n° 1 (voir Tampons phosphate et autres solutions dans la section Milieux et diluants sous Antibiotiques – Tests microbiens 81). Utilisez une partie de l’extrait tampon comme solution de test A. À une partie de 5-mL de l’extrait, ajoutez 0,1 ml de solution de pénicillinase et incubez entre 36 et 37,5 pendant 60 minutes (solution de test B).
Préparation de l'inoculum- Préparez comme indiqué sous Antibiotiques - Essais microbiens 81, en utilisant Micrococcus luteus (ATCC 9341) comme organisme de test et un inoculum qui donne des zones d'inhibition claires et nettes de 17 mm à 21 mm de diamètre avec le niveau de dose médian de la norme.
Procédure- Procédez comme indiqué pour la méthode Cylindre-Plaque sous Antibiotiques-Tests microbiens 81, en utilisant 10 ml de milieu 1 pour la couche de base et 4 ml de milieu 4 inoculé pour la couche de semences, et en incubant les plaques entre 29 et 31, sauf sur chaque plaque de test pour remplir 2 cylindres avec la solution de test A, 2 cylindres avec la solution de test B et 2 cylindres avec la dose médiane de l'étalon. Si la solution test A ne révèle aucune zone d’inhibition, le test est négatif pour la pénicilline. Si la solution test A produit une zone d’inhibition et que la solution test B ne le fait pas, de la pénicilline est présente. Déterminez son niveau à partir de la courbe standard : pas plus de 0,01 unité de pénicilline G n'est trouvée dans chaque ml de solution test A (0,2 unité de pénicilline G par g).
Mercure-
[remarque-Le dithizonate mercurique est sensible à la lumière. Effectuez ce test sous une lumière tamisée.]
Solution mère de dithizone- Dissoudre 40 mg de dithizone dans 1 000 mL de chloroforme.
Titrant dithizone- Diluer 30,0 mL de solution mère de Dithizone avec du chloroforme à 100,0 mL. Cette solution contient environ 12 mg de dithizone par L.
Solution standard- Transférer 135,4 mg de chlorure mercurique dans une fiole jaugée de 100 - mL, ajouter de l'acide sulfurique 0,25 N au volume et mélanger. Cette solution contient l'équivalent de 100 mg de Hg dans 100 mL.
Solution étalon diluée - Pipeter 2 ml de solution étalon dans une fiole jaugée de 100 - ml, ajouter de l'acide sulfurique 0,25 N au volume et mélanger. Chaque mL de cette solution contient l'équivalent de 20 µg de Hg.
Normalisation- Pipeter 1 ml de solution étalon diluée dans un séparateur de 250 ml et ajouter 100 ml d'acide sulfurique 0,25 N, 90 ml d'eau et 10 ml de solution de chlorhydrate d'hydroxylamine (1 sur 5). Ajoutez ensuite 1 ml de solution d'édétate disodique (1 sur 50), 1 ml d'acide acétique glacial et 5 ml de chloroforme, agitez pendant 1 minute, laissez séparer et jetez la couche de chloroforme. À la solution, ajoutez le titrant Dithizone, par portions de 0,3 mL à 0,5 mL, à partir d’une burette de 10-mL. Après chaque ajout, secouez le mélange 20 fois, laissez la couche de chloroforme se séparer et jetez-la. Continuez jusqu'à ce qu'une addition de titrant Dithizone reste verte après l'agitation. Calculer la quantité, en µg, de mercure équivalente à 1 mL de titrant Dithizone en divisant 20 par le nombre de mL de titrant Dithizone ajoutés.
Procédure- Transférez 500 mg de pénicillamine dans un flacon Kjeldahl de 650 ml contenant quelques billes de verre, inclinez le flacon à un angle d'environ 45 et ajoutez 2,5 ml d'acide nitrique à travers un petit entonnoir placé à l'embouchure du flacon. Laisser le mélange reposer à température ambiante jusqu'à ce que des vapeurs d'oxyde nitreux se dégagent et que la réaction vigoureuse s'apaise (5 à 30 minutes). Ajouter 2,5 mL d'acide sulfurique par l'entonnoir, et chauffer, doucement d'abord puis jusqu'à production de fumées d'anhydride sulfurique, puis refroidir. Ajoutez avec précaution 2,5 ml d'acide nitrique, chauffez à nouveau jusqu'à production de vapeurs de trioxyde de soufre et laissez refroidir. Répétez le traitement avec de l'acide nitrique et de la chaleur, puis laissez refroidir et ajoutez délicatement 50 ml d'eau, en rinçant l'entonnoir et en récupérant les rinçages dans le flacon. Retirez l'entonnoir, faites bouillir la solution jusqu'à environ la moitié de son volume (environ 25 ml) et laissez-la refroidir à température ambiante. Transférer dans un séparateur de 250 ml à l'aide d'eau et ajouter de l'eau pour obtenir environ 50 ml. Ajouter 1 ml de solution d'édétate disodique (1 sur 50) et 1 ml d'acide acétique glacial et extraire avec de petites portions de chloroforme jusqu'à ce que le dernier extrait chloroformique reste incolore. Jeter l'extrait chloroformique et ajouter 50 ml d'acide sulfurique 0,25 N, 90 ml d'eau et 10 ml de solution de chlorhydrate d'hydroxylamine (1 sur 5). Ajouter le titrant Dithizone, par portions de 0,3 mL à 0,5 mL, à partir d’une burette de 10-mL. Après chaque ajout, secouez le mélange 20 fois, laissez la couche de chloroforme se séparer et jetez-la. Continuez jusqu'à ce qu'une addition de titrant Dithizone reste verte après l'agitation. Calculez la quantité de mercure présente : la limite est de 10 µg (0,002 %).
Limite du disulfure de pénicillamine -
Diluant, phase mobile et solution de résolution - Préparer comme indiqué dans le test.
Préparation standard- Dissoudre une quantité pesée avec précision de disulfure de pénicillamine USP RS dans un diluant pour obtenir une solution ayant une concentration connue d'environ 0,025 mg par ml.
Préparation aux tests- Utilisez la préparation Assay.
Système chromatographique- Procédez comme indiqué dans le test. Chromatographier la préparation standard et enregistrer les réponses maximales du disulfure de pénicillamine comme indiqué pour la procédure : l'écart type relatif pour les injections répétées n'est pas supérieur à 2,0 %.
Procédure- [Remarque-Utilisez les zones de pic où les réponses maximales sont indiquées.] Injectez séparément des volumes égaux (environ 20 µL) de la préparation standard et de la préparation test dans le chromatographe, enregistrez les chromatogrammes et mesurez les réponses pour les pics de disulfure de pénicillamine. Calculez le pourcentage de disulfure de pénicillamine (C10H20N2O4S2) dans la pénicillamine pris par la formule :
100(CS/CU)(rU/rS)
dans laquelle CS est la concentration, en mg par ml, de disulfure de pénicillamine USP RS dans la préparation standard, CU est la concentration, en mg par ml, de pénicillamine dans la préparation de test, et rU et rS sont les réponses maximales du disulfure de pénicillamine obtenues respectivement à partir de la préparation de test et de la préparation standard : pas plus de 1,0 % de disulfure de pénicillamine est trouvé.
Dosage-
Diluant- Dissoudre 1,0 g d'édétate disodique dans l'eau pour obtenir 1 000 ml de solution.
Phase mobile- Dissoudre 6,9 ​​g de phosphate de sodium monobasique et 0,20 g de 1-hexanesulfonate de sodium dans l'eau pour obtenir 1 000 ml de solution. Ajuster avec de l'acide phosphorique à un pH de 3,0 ± 0,1 et filtrer à travers un filtre approprié de 1 µm ou de porosité plus fine. Effectuez des ajustements si nécessaire (voir Adéquation du système sous Chromatographie<621>).
Solution de résolution- Préparer une solution dans un diluant contenant environ 1 mg de pénicillamine USP RS et 0,1 mg de disulfure de pénicillamine USP RS par ml.
Préparation standard- Dissoudre une quantité précisément pesée de pénicillamine RS USP dans le diluant pour obtenir une solution ayant une concentration d'environ 1,25 mg par ml.
Préparation du test- Transférer environ 125 mg de pénicillamine, pesés avec précision, dans une fiole jaugée de 100 ml, dissoudre et diluer avec le diluant jusqu'au volume, puis mélanger.
Système chromatographique (voir Chromatographie<621>)-Le chromatographe liquide est équipé d'un détecteur de 210-nm et d'une colonne de 3,9-mm × 30-cm contenant le garnissage L1. Le débit est d'environ 1,6 ml par minute. Chromatographez la solution de résolution et enregistrez les réponses comme indiqué pour la procédure : les temps de rétention relatifs sont d'environ 0,7 pour la pénicillamine et 1,0 pour le disulfure de pénicillamine, et la résolution, R, entre le pic de pénicillamine et le pic de disulfure de pénicillamine n'est pas inférieure à 3,0. Chromatographiez la préparation standard et enregistrez les réponses comme indiqué pour la procédure : l'écart type relatif pour les injections répétées n'est pas supérieur à 1,0 %.
Procédure- [remarque-Utilisez les zones de pic où les réponses maximales sont indiquées. ] Injectez séparément des volumes égaux (environ 20 µL) de la préparation standard et de la préparation de test dans le chromatographe, enregistrez les chromatogrammes et mesurez les réponses pour les pics majeurs. Calculez la quantité, en mg, de pénicillamine (C5H11NO2S) dans la portion de Pénicillamine prise par la formule :
100C(RU/RS)
dans laquelle C est la concentration, en mg par ml, de pénicillamine USP RS dans la préparation standard, et rU et rS sont les réponses maximales à la pénicillamine obtenues à partir de la préparation du test et de la préparation standard, respectivement.